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- 2023-03-18 02:10:02 发布
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血红蛋白的提取和分离
思考 1：分离生物大分子的基本思路是什么？
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
思考 2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的
性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。
思考 3： 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？
变性、变性、空间结构
思考 4：人们用鸡的红细胞提取 DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？
鸡的红细胞具有细胞核，含有 DNA，便于进行 DNA 的提取，人的红细胞无细胞核，结构简
单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白
一、基础知识：
㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：
1、概念：根据被分离蛋白质的（ ），利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有
效方法。
2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移
动速度（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（），移动速度
（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3、具体过程：
A.的蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之
间迅速通过。
B.（1）混合物上柱；
（2）洗脱开始，的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；
凝
胶
颗
粒
相对分子质量
较小的蛋白质
相对分子质量
较大的蛋白质
（1） （2） （3） （4） （5）
B
A
多
孔
板
（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。
（4）不同的蛋白质分子完全分开；
（5）的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来，的蛋白质还在行进中。
㈡ 缓冲溶液：
1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH 发生明显变化的
作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
2、作用：能够抵制（）的对溶液的（）的影响，维持 PH 基本不变。
3、缓冲溶液的配制
通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（ ）使用的缓冲液。
思考：说出人体血液中缓冲对？
思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？
使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正常结构和
功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）
㈢电泳：
1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2、原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上（ ） 。在电
场的作用下，这些带电分子会向着与其（ ）
移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（ ）以及分子本身（ ）、（ ）的不同使带电分子产生不
同的（ ），从而实现样品中各种分子的分离。
3、分类：
琼脂糖凝胶电泳
聚丙稀酰胺凝胶电泳。
测定（ 蛋白质相对分子质量 ）通常用十二烷
基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于
它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在
凝胶中加入()。SDS 能使蛋白质发生完全变性。
由几条肽链组成的蛋白质复合体在 SDS 的作
用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS 能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复
合物，SDS 所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷
差别，使电泳迁移率完全取决于( )。
二 实验操作
蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定
1.样品处理
(1)红细胞的洗涤
①目的：去除（）
②方法：（）离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），
然后用胶头吸管吸出上层透明的（），将下层（ ）的红细胞液体倒入（ ）
再加入用（ ）的（）质量分数为 0.9％的氯化钠溶液洗涤
⑤低速离心（低速短时间）
⑥重复 4、5 步骤（ ）次，直至上清液...
思考 1：分离生物大分子的基本思路是什么？
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
思考 2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的
性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。
思考 3： 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？
变性、变性、空间结构
思考 4：人们用鸡的红细胞提取 DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？
鸡的红细胞具有细胞核，含有 DNA，便于进行 DNA 的提取，人的红细胞无细胞核，结构简
单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白
一、基础知识：
㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：
1、概念：根据被分离蛋白质的（ ），利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有
效方法。
2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移
动速度（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（），移动速度
（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3、具体过程：
A.的蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之
间迅速通过。
B.（1）混合物上柱；
（2）洗脱开始，的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；
凝
胶
颗
粒
相对分子质量
较小的蛋白质
相对分子质量
较大的蛋白质
（1） （2） （3） （4） （5）
B
A
多
孔
板
（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。
（4）不同的蛋白质分子完全分开；
（5）的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来，的蛋白质还在行进中。
㈡ 缓冲溶液：
1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH 发生明显变化的
作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
2、作用：能够抵制（）的对溶液的（）的影响，维持 PH 基本不变。
3、缓冲溶液的配制
通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（ ）使用的缓冲液。
思考：说出人体血液中缓冲对？
思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？
使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正常结构和
功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）
㈢电泳：
1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2、原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上（ ） 。在电
场的作用下，这些带电分子会向着与其（ ）
移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（ ）以及分子本身（ ）、（ ）的不同使带电分子产生不
同的（ ），从而实现样品中各种分子的分离。
3、分类：
琼脂糖凝胶电泳
聚丙稀酰胺凝胶电泳。
测定（ 蛋白质相对分子质量 ）通常用十二烷
基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于
它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在
凝胶中加入()。SDS 能使蛋白质发生完全变性。
由几条肽链组成的蛋白质复合体在 SDS 的作
用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS 能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复
合物，SDS 所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷
差别，使电泳迁移率完全取决于( )。
二 实验操作
蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定
1.样品处理
(1)红细胞的洗涤
①目的：去除（）
②方法：（）离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），
然后用胶头吸管吸出上层透明的（），将下层（ ）的红细胞液体倒入（ ）
再加入用（ ）的（）质量分数为 0.9％的氯化钠溶液洗涤
⑤低速离心（低速短时间）
⑥重复 4、5 步骤（ ）次，直至上清液...