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- 2023-03-18 01:40:02 发布
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课时 1 DNA 的粗提取与鉴定
一、实验目的：
初步掌握 DNA 的粗提取和鉴定的方法。
二、实验原理：
1．DNA 的溶解性：
思考题 1：DNA 在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？
思考题 2：利用什么原理来将 DNA 与蛋白质分离开？
2．DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解，但对没有影响
大多数蛋白质不能忍受℃的高温，而 DNA在℃以上才会变性。能够瓦
细胞膜，但对 DNA没有影响。
3．细胞在中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核 DNA的溶液。
4．DNA的鉴定：
思考题 3：依据什么原理来鉴定 DNA？
三、实验材料：鸡血细胞液
思考题 4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做
实验材料？为什么？
四、实验步骤：
1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为 0．1g/mL 的溶液，离心处理；
2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；
思考题 5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？
3．溶解细胞核内的 DNA：加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA 呈溶解状态；
4．析出含 DNA 的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；
思考题 6：此时加入蒸馏水的目的是什么？
5．滤取含 DNA 的黏稠物：过滤；
思考题 7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？
6．将 DNA 的黏稠物再溶解：加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA 呈溶解状态；
7．过滤含有 DNA 的氯化钠溶液：过滤；
思考题 8：这一步骤的目的是什么？
思考题 9：为什么反复地溶解与析出 DNA，能够去除杂质？
8．提取含杂质较少的 DNA：加入冷却的 95%的酒精，搅拌；
思考题 10：这一步骤的目的是什么？
思考题 11：为什么加入的酒精需要冷却的？
9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入 0．015mol/L 的氯化钠溶液 5mL，一支加入提取的 DNA
两支各加入 4mL 的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。
思考题 12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？
五、课堂练习：
1．为了便于提取鸡血细胞中的 DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血
液加入（）
A．蒸馏水 B．ATP
C．0.3g/mL的蔗糖溶液 D．二氧化碳
2．下列不适宜作为 DNA提取的实验材料是 （）
A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞
C．人的成熟红细胞 D．菜花
3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的 DNA．这是因
为：（）
A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精
B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精
C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精
D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精
4．（多选）下表是关于 DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是：
（）
试剂 操作 作用
A 柠檬酸钠溶液 与鸡血混合 防止血液凝固
B 蒸馏水 与鸡血细胞混合 保持细胞形状
C 蒸馏水 加入到溶解有 DNA的 NaCl中 析出 DNA丝状物
D 冷却的酒精 加入到过滤后 DNA的 NaCl中 产生特定的颜色反应
5．在进行 DNA粗提取实验时，为得到含 DNA的黏稠物，某同学进行了如下操作：
① 在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。
② 取 5―10ml血细胞放入 50ml的塑料烧杯中，并立即注入 20ml 0.015mol／L的氯化
钠溶液，快速搅拌 5分钟后经滤纸过滤，取得其滤液。
③ 滤液中加入 40ml 2mol／L的氯化钠溶液，并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌 1分钟。
④ 上述溶液中缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，直到溶液
中出现丝状物为止，再进行过滤而得到含 DNA的黏稠物。
实验结果是：所得到的含 DNA的黏稠物极少，导致下一步试验无法进行。
（1）指出并改正上述实验操作中的错误：
，，
。
(2)要进一步...
一、实验目的：
初步掌握 DNA 的粗提取和鉴定的方法。
二、实验原理：
1．DNA 的溶解性：
思考题 1：DNA 在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？
思考题 2：利用什么原理来将 DNA 与蛋白质分离开？
2．DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解，但对没有影响
大多数蛋白质不能忍受℃的高温，而 DNA在℃以上才会变性。能够瓦
细胞膜，但对 DNA没有影响。
3．细胞在中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核 DNA的溶液。
4．DNA的鉴定：
思考题 3：依据什么原理来鉴定 DNA？
三、实验材料：鸡血细胞液
思考题 4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做
实验材料？为什么？
四、实验步骤：
1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为 0．1g/mL 的溶液，离心处理；
2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；
思考题 5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？
3．溶解细胞核内的 DNA：加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA 呈溶解状态；
4．析出含 DNA 的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；
思考题 6：此时加入蒸馏水的目的是什么？
5．滤取含 DNA 的黏稠物：过滤；
思考题 7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？
6．将 DNA 的黏稠物再溶解：加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA 呈溶解状态；
7．过滤含有 DNA 的氯化钠溶液：过滤；
思考题 8：这一步骤的目的是什么？
思考题 9：为什么反复地溶解与析出 DNA，能够去除杂质？
8．提取含杂质较少的 DNA：加入冷却的 95%的酒精，搅拌；
思考题 10：这一步骤的目的是什么？
思考题 11：为什么加入的酒精需要冷却的？
9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入 0．015mol/L 的氯化钠溶液 5mL，一支加入提取的 DNA
两支各加入 4mL 的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。
思考题 12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？
五、课堂练习：
1．为了便于提取鸡血细胞中的 DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血
液加入（）
A．蒸馏水 B．ATP
C．0.3g/mL的蔗糖溶液 D．二氧化碳
2．下列不适宜作为 DNA提取的实验材料是 （）
A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞
C．人的成熟红细胞 D．菜花
3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的 DNA．这是因
为：（）
A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精
B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精
C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精
D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精
4．（多选）下表是关于 DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是：
（）
试剂 操作 作用
A 柠檬酸钠溶液 与鸡血混合 防止血液凝固
B 蒸馏水 与鸡血细胞混合 保持细胞形状
C 蒸馏水 加入到溶解有 DNA的 NaCl中 析出 DNA丝状物
D 冷却的酒精 加入到过滤后 DNA的 NaCl中 产生特定的颜色反应
5．在进行 DNA粗提取实验时，为得到含 DNA的黏稠物，某同学进行了如下操作：
① 在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。
② 取 5―10ml血细胞放入 50ml的塑料烧杯中，并立即注入 20ml 0.015mol／L的氯化
钠溶液，快速搅拌 5分钟后经滤纸过滤，取得其滤液。
③ 滤液中加入 40ml 2mol／L的氯化钠溶液，并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌 1分钟。
④ 上述溶液中缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，直到溶液
中出现丝状物为止，再进行过滤而得到含 DNA的黏稠物。
实验结果是：所得到的含 DNA的黏稠物极少，导致下一步试验无法进行。
（1）指出并改正上述实验操作中的错误：
，，
。
(2)要进一步...