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- 2023-03-17 19:05:02 发布
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专题八 生物技术实践
核心考点整合
考点整合一：微生物的培养及应用
培养基种类及用途
划分
标准
培养基种类 特点 途径
液体培养基 不加凝固剂 工业生产
半固体
培养基
观察微生物的运动、分
类鉴定
物理
固体培养基
加凝固剂，如琼脂
微生物分离、鉴定、活
菌计数、保藏菌种
天然培养基 含化学成分不明确的
天然物质
工业生产化学
成分
合成培养基 培养基成分明确（用化
学成分已知的化学物
质配成）
分类、鉴定
选择培养基 培养基中加入某种化
学物质，以抑制不需要
的微生物的生长，促进
所需要的微生物的生
长
培养、分离出特定微生
物（如培养酵母菌和霉
菌时，可在培养基中加
入青霉素；培养金黄色
葡萄球菌时，可在培养
基中加入高浓度的食
盐）
用途
鉴别培养基 根据微生物的代谢特
点，在培养基中加入某
种指示剂或化学药品
鉴别不同种类的微生
物，如可用伊红—美蓝
培养基鉴别饮用水或
乳制品中是否有大肠
杆菌（若有，菌落呈深
紫色，并带有金属光泽）
2．无菌技术（消毒和灭菌的区别）
项目 消毒 灭菌
条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素
结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害
的微生物（不包括芽孢和孢子）
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢
和孢子
适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基
等
常用
方法
煮沸消毒法（如在 100℃，煮沸 5～6
min）、巴氏消毒法（如在 80℃，煮 15
min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学
药剂进行消毒
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
3.统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少个活菌。
②操作：
A．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列 10倍稀释，然后选择三个稀释
度的菌液，分别取 0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面，
放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到三个或三个以上
的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。
B．为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30～300 个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相
差太远，意味着操作有误，需重新实验。
③计算公式：每个样品中的菌＝ ，其中 C代表某一稀释度下平板上生长的平均
菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
说明：此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，
平板上观察到的只是一个菌落。
（2）显微镜直接计数法
①原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，
但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1 mm2）和高（0.1
mm）的计数室，在 1 mm2 的面积里又被划分成 25 个（或 16 个）中格，每个中格进一步划分成 16
个（或者 25个）小格，但计数室都是由 400个小格组成。
②操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统
计 4～5 个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中
所含的细菌数。
③计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。
（3）滤膜法：以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红—
美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现深紫色，可根据培养基上深紫色的菌落数目，
计算出水样中大肠杆菌的数量。
【例 1】（2009·宁夏理综、辽宁理综）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考
虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、
________、_________________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，...
核心考点整合
考点整合一：微生物的培养及应用
培养基种类及用途
划分
标准
培养基种类 特点 途径
液体培养基 不加凝固剂 工业生产
半固体
培养基
观察微生物的运动、分
类鉴定
物理
固体培养基
加凝固剂，如琼脂
微生物分离、鉴定、活
菌计数、保藏菌种
天然培养基 含化学成分不明确的
天然物质
工业生产化学
成分
合成培养基 培养基成分明确（用化
学成分已知的化学物
质配成）
分类、鉴定
选择培养基 培养基中加入某种化
学物质，以抑制不需要
的微生物的生长，促进
所需要的微生物的生
长
培养、分离出特定微生
物（如培养酵母菌和霉
菌时，可在培养基中加
入青霉素；培养金黄色
葡萄球菌时，可在培养
基中加入高浓度的食
盐）
用途
鉴别培养基 根据微生物的代谢特
点，在培养基中加入某
种指示剂或化学药品
鉴别不同种类的微生
物，如可用伊红—美蓝
培养基鉴别饮用水或
乳制品中是否有大肠
杆菌（若有，菌落呈深
紫色，并带有金属光泽）
2．无菌技术（消毒和灭菌的区别）
项目 消毒 灭菌
条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素
结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害
的微生物（不包括芽孢和孢子）
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢
和孢子
适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基
等
常用
方法
煮沸消毒法（如在 100℃，煮沸 5～6
min）、巴氏消毒法（如在 80℃，煮 15
min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学
药剂进行消毒
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
3.统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少个活菌。
②操作：
A．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列 10倍稀释，然后选择三个稀释
度的菌液，分别取 0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面，
放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到三个或三个以上
的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。
B．为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30～300 个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相
差太远，意味着操作有误，需重新实验。
③计算公式：每个样品中的菌＝ ，其中 C代表某一稀释度下平板上生长的平均
菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
说明：此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，
平板上观察到的只是一个菌落。
（2）显微镜直接计数法
①原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，
但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1 mm2）和高（0.1
mm）的计数室，在 1 mm2 的面积里又被划分成 25 个（或 16 个）中格，每个中格进一步划分成 16
个（或者 25个）小格，但计数室都是由 400个小格组成。
②操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统
计 4～5 个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中
所含的细菌数。
③计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。
（3）滤膜法：以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红—
美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现深紫色，可根据培养基上深紫色的菌落数目，
计算出水样中大肠杆菌的数量。
【例 1】（2009·宁夏理综、辽宁理综）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考
虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、
________、_________________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，...