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- 2023-03-14 18:55:02 发布
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专题1 基因工程
总结提升
知识建网
要语必背
1.限制性核酸内切酶可识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并在特定位点上切割DNA分子。
2.质粒作为基因工程的载体需具备的条件有:能在宿主细胞内稳定保存并自我复制;具有一个至多个限制酶切割位点;具有标记基因。
3.基因表达载体的构建是基因工程的核心,一个基因表达载体的组成,除了目的基因外,还必须有启动子、终止子以及标记基因等。
4.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞常用显微注射技术,导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2+处理法)。
5.检测目的基因是否导入受体细胞染色体DNA上常用DNA分子杂交技术;检测是否转录,常用分子杂交技术;检测是否翻译,常用抗原—抗体杂交技术。
6.蛋白质工程并不是直接改造蛋白质分子的结构,而是通过基因操作来实现对天然蛋白质的改造。
7.蛋白质工程的基本途径是:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
一、几种重要酶的比较
种类
项目
限制酶
DNA连接酶
DNA聚合酶
解旋酶
作用底物
DNA分子
DNA分子片段
脱氧核苷酸
DNA分子
作用部位
磷酸二酯键
磷酸二酯键
磷酸二酯键
碱基对间的
氢键
作用特点
切割目的基因及载体,能专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开
将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上
将DNA两条链之间的氢键打开
作用结果
形成黏性末端或平末端
形成重组DNA分子
形成新的DNA分子
形成单链DNA分子
特别提醒 在基因工程中反(逆)转录酶也常被使用。反(逆)转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA所需的酶。反(逆)转录酶催化的反应叫反(逆)转录。在这个过程中,遗传信息流动的方向是从RNA到DNA,正好与转录过程相反,故称反转录。
例1 下图为DNA分子的某一片段,其中①②③分别表示某种酶的作用部位,则相应的酶依次是( )
A.DNA连接酶、限制酶、解旋酶
B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶
C.解旋酶、限制酶、DNA连接酶
D.限制酶、DNA连接酶、解旋酶
答案 C
解析 限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂,形成黏性末端或平末端;DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键;解旋酶能使DNA分子双螺旋结构解开,氢键断裂;所以①处是解旋酶作用部位,②处是限制酶作用部位,③处是DNA连接酶作用部位。
二、易混概念辨析
基因工程的基本操作程序中存在多组易混的概念,它们是学习中的难点;只有把它们的区别和联系搞清楚,才能正确掌握关于基因工程的基本操作程序的知识。下面是对几组易混概念的辨析。
1.基因文库、基因组文库、部分基因文库
(1)从定义上区分
①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。基因文库是指储存有某种生物基因的菌群的总称。
②基因组文库:如果基因文库中含有一种生物的所有基因,这种基因文库叫做基因组文库。
③部分基因文库:指含有一种生物的一部分基因的基因文库,如cDNA文库。
(2)从范围上区分:基因文库包含基因组文库和部分基因文库。基因组文库有某一种生物的全部基因,它的范围要大于部分基因文库。
2.启动子、终止子、起始密码子、终止密码子
(1)从定义上区分
①启动子:位于编码区上游紧靠转录起点的位置。它的主要功能是引导RNA聚合酶与基因的正确部位结合。只有在启动子存在时,RNA聚合酶才能准确地从转录起点开始,沿着编码区正常地进行转录。
②终止子:位于编码区下游紧靠转录终点的位置。它的特殊的碱基排列顺序能够阻碍RNA聚合酶的移动,并使其从DNA模板链上脱离下来。
③密码子:指信使RNA上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基。信使RNA上四种碱基的组合方式有64种,其中,决定氨基酸的密码子有61种,3种是终止密码子。
④终止密码子:...